摘要:[目的]探讨植物活性成分中四种代表性单体活性物质阿魏酸、绿原酸、荭草素和异荭草素对CHO细胞的毒性作用大小和这四种单体物质对CHO细胞是否具有致DNA链断裂的毒性作用以及导致这一结果的作用剂量。
[方法]通过MTT的方法测定四种活性单体物质对CHO细胞增殖毒性作用并求出其IC50,采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测1-1600 μM四种活性单体物质对CHO细胞的DNA损伤作用。
[结果]通过MTT检测,阿魏酸对CHO 细胞的增殖毒性明显,其半抑制浓度IC50值为1541μM;而绿原酸、荭草素和异荭草素对CHO 细胞均无明显的增殖毒性,无法求得IC50值,但是异荭草素在400μM和800μM时,对细胞有明显的促增殖效应。通过单细胞凝胶电泳试验,阿魏酸对DNA的损伤作用随浓度的增高而增强,100μM和200μM的处理组对CHO细胞无明显的致DNA损伤作用,而400μM 、800μM和1600μM处理组对CHO细胞表现出明显的致DNA损伤作用,其中400μM和800μM处理组的DNA损伤程度要低于阳性对照组,而1600μM浓度组的DNA损伤程度与阳性对照组相当;绿原酸和荭草素的1600μM处理组对CHO细胞有明显的致DNA损伤作用,但要远低于阳性对照组,而其他浓度处理组对CHO细胞则无明显的致DNA损伤作用;异荭草素各浓度处理组对CHO细胞均无明显的致DNA损伤作用。
[结论]在四种单体物质中,阿魏酸对CHO细胞的毒性作用最明显,在最高处理浓度时,细胞存活率低于50%,致DNA损伤程度与50μM甲基磺酸甲酯(阳性对照)相当;而绿原酸、荭草素和异荭草素则均未对CHO细胞表现出明显的毒性作用,细胞存活率都在100%上下波动,DNA的损伤相对也较不明显。
关键词:植物活性物质;MTT;DNA损伤;单细胞凝胶电泳
目录
摘要
Abstract
引言-1
1 材料与方法-3
1.1 材料-3
1.1.1 细胞株-3
1.1.2 主要试剂-3
1.1.3 主要仪器-3
1.2 方法-4
1.2.1 试剂的配制-4
1.2.2细胞培养-5
1.2.2.1 细胞复苏-5
1.2.2.2细胞传代-5
1.2.2.3细胞冻存-6
1.2.3 细胞增值毒性的MTT检测-6
1.2.4 SCGE试验-6
1.2.4.1 细胞处理-6
1.2.4.2 单细胞凝胶电泳-6
1.2.4.3 彗星分析-7
1.2.5 统计学方法-7
2 结果-8
2.1 细胞增殖毒性的MTT检测-8
2.1.1绿原酸对CHO细胞的增殖毒性-8
2.1.2阿魏酸对CHO细胞的增殖毒性-8
2.1.3荭草素对CHO细胞的增殖毒性-9
2.1.4异荭草素对CHO细胞的增殖毒性-9
2.1.5 四种单体物质对CHO细胞增殖毒性的比较-10
2.2 彗星试验结果-11
2.2.1 绿原酸试验结果-11
2.2.2 阿魏酸试验结果-11
2.2.3 荭草素试验结果-12
2.2.4 异荭草素试验结果-13
2.2.5 四种植物单体物质对CHO细胞DNA损伤作用的比较-13
2.3 四种植物化学物质的细胞毒性与DNA损伤作用关系的分析-14
3 讨论-15
参考文献-17
致谢-19