摘要：本论文对一株产碱性蛋白酶的芽孢杆菌进行了分子鉴定、发酵分析和酶活分析。利用PCR技术对该菌株16S rDNA序列进行扩增，获得了1435 bp的序列，将其与NCBI Genbank相关数据进行比对，使用DNAMAN软件分析相关序列，确定该菌株是一株芽孢杆菌。对该芽孢杆菌进行发酵培养，优化酶反应条件，分别在不同pH、温度，添加不同金属离子，对该菌株碱性蛋白酶酶活的影响进行分析。结果显示，该菌在连续液体发酵48 h达到产酶高峰，pH11，反应温度在40 ℃时酶活最高，达到41.23 U/mL。Cu2+对该菌株的蛋白酶活性有促进作用，Zn2+、Ca2+、Mn2+对酶活没有明显影响。
关键词：碱性蛋白酶；发酵培养；芽孢杆菌；酶学分析
目录
摘要
Abstract
1 绪论-1
1.1 微生物产酶的条件控制-1
1.2 蛋白酶的研究与应用-1
1.2.1 酶蛋白的分类-1
1.2.2 蛋白酶的专一性-1
1.2.3 微生物蛋白酶的酶系组成-1
1.2.4 主要蛋白酶及其性质-2
1.2.5 蛋白酶的应用-3
1.3 微生物产碱性蛋白酶的研究-4
1.3.1 碱性蛋白酶的简介-4
1.3.2 碱性蛋白酶的研究进展-5
1.4 本研究的意义-6
2材料与方法-7
2.1 实验材料-7
2.1.1菌株-7
2.1.2试剂配制-7
2.1.3主要仪器设备-8
2.2 培养基的配制-8
2.3 高压灭菌及操作台的消毒-8
2.4 菌株保藏-9
2.5 菌种的活化-9
2.6 福林试剂检测碱性蛋白酶活性-9
2.7 碱性蛋白酶发酵液中酶活的测量方法-10
3 结果与讨论-12
3.1 产酶菌株的16S rDNA序列-12
3.2 酶学性质研究-12
3.2.1 酶活定义-12
3.2.2 标准曲线的绘制-13
3.2.3 培养时间对产酶的影响-13
3.2.4 反应pH对酶活的影响-14
3.2.5 反应温度对酶活的影响-14
3.2.6 金属离子对酶活的影响-15
3.3讨论-15
结论-17
致谢-18
参考文献-19
