摘要:目的:本课题拟在细胞水平验证牛磺酸的降低胆固醇作用,进而为今后在分子水平深入研究牛磺酸降脂的作用机制打下基础。方法:体外培养人肝细胞HepG 2,采用MTT方法检测牛磺酸对HepG2细胞增殖状态的影响;利用氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)建立高胆固醇模型;利用油红O染色法,研究不同剂量的牛磺酸对高胆固醇HepG2细胞内脂质含量的影响,并初步建立和优化细胞内胆固醇检测方法。结果: MTT法结果显示细胞在浓度为低于30mM牛磺酸下,对细胞增殖影响无显著差异,对细胞无毒性作用;油红O染色结果显示,在83μg/mL浓度的ox-LDL下,细胞内脂质含量明显升高,高胆固醇模型初步建立;在5mM,10mM,25mM浓度的牛磺酸下,细胞内脂质含量较模型组有降低趋势。关于细胞内胆固醇浓度的测定,采用酶法测定游离胆固醇(FC)。结论:对肝细胞HepG2增殖无影响的牛磺酸浓度为小于30mM;83μg/mLox-LDL可诱导肝细胞高胆固醇模型,5mM,10mM,25mM浓度的牛磺酸对细胞内脂质含量有降低作用,初步建立了细胞内胆固醇浓度酶法测定方法。
关键词: 牛磺酸 胆固醇 HepG2细胞
目录
摘要
Abstract
引言
1.1高胆固醇血症-1
1.2牛磺酸的概况-1
1.3.牛磺酸降胆固醇作用-1
2 材料与方法-2
2.1细胞培养试剂-2
2.2油红O染色所需试剂-3
2.3 MTT比色试验所需试剂-3
2.4细胞内胆固醇测定试剂-3
2.5实验仪器-4
2.6 实验方法-5
2.6.1细胞培养-5
2.6.2牛磺酸浓度的筛选(MTT法)-5
2.6.3高胆固醇模型及分组-6
2.7油红O染色法-6
2.8细胞内胆固醇测定-6
2.9统计学分析-8
3 实验结果-8
3.1牛磺酸浓度的筛选-8
3.2高脂模型的建立-9
3.3牛磺酸对HepG2细胞脂质含量的影响-10
3.4细胞内胆固醇测定-10
结论
参考文献
致谢