摘要:本课题以食品生物工程实验中心酶工程实验室保藏的黑曲霉菌株为出发菌株,经过液体深层发酵生产内切型菊粉酶。以牛蒡为唯一碳源,从20株黑曲霉菌株中筛选出菊粉酶酶活最高的菌株,为编号E133131的菌株,酶活为0.66U/mL。
用紫外线(260nm波长、15W、30cm)对E133131菌株进行诱变,从生长出来的菌株中筛选出20株菌落直径最大的菌株,进行内切型菊粉酶的发酵生产,再测定内切型菊粉酶的酶活,从中筛选出一株酶活最高的菌株09-BZ-011,酶活为0.80U/mL,比出发菌株E133131的酶活提高了21.21%。
再用甲基磺酸乙酯(0.70moL/L)对09-BZ-011菌株进行化学诱变,从生长出来的菌株中筛选出20株菌落直径最大的菌株,进行内切型菊粉酶的发酵生产,再测定内切型菊粉酶的酶活,从中筛选出一株酶活最高的菌株09-BZ-016-J002,酶活为1.11U/mL,比原始菌株E133131的酶活提高了68.18%。
最后用氯化锂(1.1%的处理浓度)对09-BZ-016-J002菌株进行化学诱变,从生长出来的菌株中筛选出20株菌落直径最大的菌株,内切型菊粉酶的发酵生产,再测定内切型菊粉酶的酶活,从中筛选出一株酶活最高的菌株09-BZ-016-J004-L001,09-BZ-016-J004-L005,酶活为1.65U/mL,比原始菌株E133131的酶活提高了150%。
将经过三种诱变剂诱变而筛选出来的菌株进行十代传代培养,十代的酶活均在1.27~1.60U/mL,酶活浮动范围为±0.19,说明筛选出来的菌株遗传性状较稳定。
关键词 黑曲霉;紫外线;甲基磺酸乙酯;氯化锂;诱变