摘要:本研究采用具有降解有机磷农药特性的微生物黄杆菌（Flavorbacterium. sp A TCC27551），其含有的pDL2质粒携带编码有机磷水解酶opd基因。因为黄杆菌本身的遗传背景不甚明了，难于直接构建基因工程菌，所以将质粒pDL2携带的opd基因改造后导入E.coli，方便提纯和检测，为进一步构建广谱的农药降解菌提供基础及依据。
以抽提的黄杆菌质粒pDL2为模板PCR扩增出opd基因全长片段，通过PCR产物与载体连接并转入感受态细胞内，通过蓝白斑筛选，以白斑菌落PCR扩增，电泳验证，确定转化成功。从而将黄杆菌质粒上的一段长达1098bp的opd基因进行扩增及克隆，获得方便opd基因提纯和检测的菌株。
关键词 黄杆菌；opd基因；克隆与鉴定
目录
摘要
Abstract
1 绪论-1
1.1 有机磷农药概况-1
1.1.1 有机磷农药定义及其分类与特点-1
1.1.2 有机磷农药的使用现状-2
1.1.3 有机磷农药的危害-2
1.1.4 有机磷农药的降解方法-3
1.2微生物降解技术-3
1.2.1微生物降解技术原理-3
1.2.2 微生物降解技术研究概况-3
1.3 本论文研究的目的及意义-4
2 材料与方法-5
2.1 实验试剂与仪器-5
2.1.1 实验试剂-5
2.1.2 实验仪器-5
2.1.3 实验材料-5
2.2 实验方法-6
2.2.1培养基及菌体活化-6
2.2.2 黄杆菌质粒提取-6
2.2.3 opd基因扩增及电泳验证-8
2.2.4 PCR结果测序-9
2.2.5 opd基因克隆与转化-9
2.2.6 转化结果验证-10
3 结果分析-11
3.1 质粒抽提结果-11
3.1.1 碱裂解法微量抽提质粒结果-11
3.1.2 碱裂解法大量抽提质粒结果-12
3.2 opd基因扩增-12
3.2.1菌落PCR结果-12
3.2.2菌悬液PCR结果-13
3.3测序结果分析-13
3.3.1黄杆菌质粒上完整的opd基因-13
3.3.2 测得序列-14
3.4 克隆与转化-16
3.4.1 蓝白斑筛选-16
3.4.2 转化结果验证-16
结论-18
致谢-19
参考文献-20
