摘要:本论文是将国槐枝干的韧皮部分进行培养,将培养出来的菌株进行3~5次分离纯化,主要包括毛霉,青霉,曲霉和根霉四大类,其中GH-3、GH-35属于毛霉,GH-2、GH-4属于青霉,GH-1、GH-6、GH-24、GH-25属于曲霉,GH-7、GH-10、GH-14、GH-19、GH-21、GH-22属于根霉。再将得到的14个菌株进行发酵和萃取处理,将得到的各相萃取液通过DPPH抗氧化测定方法测定抗氧化活性,筛选出抗氧化活性最强的菌株萃取相,并确定GH-2的乙酸乙酯相为研究对象,其抗氧化活性最强,DPPH自由基清除率为92.28%。,然后用薄层点样的方法,经展开剂展开后,通过碘蒸汽熏蒸和紫外光分析仪的检测,确定其最佳抗氧化斑点的Rf值为0.57。通过凝胶柱层析和硅胶柱层析方法的分离,L-1和L-2为纯度较高的样品,再用高效液相色谱和薄层层析法进行活性验证,均验证为纯度较高的样品。
关键词 国槐内生真菌;分离纯化;发酵液;抗氧化性
目录
1 绪论-1
1.1 内生真菌的概述-1
1.1.1 真菌简介-1
1.1.2 植物内生真菌-1
1.2 药用植物内生真菌生物活性物质概述-2
1.2.1生物碱类-2
1.2.2萜类-2
1.2.3醌类-3
1.2.4木脂素类-3
1.2.5环肽类-3
1.2.6其他类-3
1.3 国槐简介-3
1.4 本项目研究目的及意义-4
2 材料与方法-5
2.1 实验材料-5
2.1.1 实验菌种-5
2.1.2 化学试剂-5
2.1.3 仪器-5
2.1.4 培养基-6
2.2 实验方法-6
2.2.1 采样、菌株的分离纯化及分类-6
2.2.2菌株摇瓶发酵液培养及样品处理-6
2.2.3 国槐内生真菌抗氧化活性研究-7
2.2.4菌株抗氧化活性组分的分离纯化-8
3结果与分析-11
3.2 菌株的确定-13
3.3展开剂的确定-14
3.4活性组分的初步分离-16
3.5活性组分的二次分离-16
3.6活性组分的进一步纯化-17
3.7纯度验证-17
3.7.1高效液相色谱法-17
3.7.2 薄层层析法(TLC)-18
结论-20
致谢-21
参考文献-22