摘要:三唑磷作为一种高效有机磷农药被广泛使用,但目前对其的免疫分析检测方法尚不常见。本文以三唑磷为研究对象,设计并利用三步反应最终生成三唑磷半抗原,然后采用碳二亚胺法,将三唑磷半抗原与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联进而制备免疫抗原,与卵清白蛋白(OVA)进行偶联进而制备包被抗原,并使用紫外分光光度计对半抗原、BSA、OVA、免疫抗原、包被抗原的特征吸收峰进行测定,从而测得三唑磷免疫抗原的吸收峰在272nm处,介于BSA(278nm)与半抗原(235nm)的吸收峰值之间,从而可以判定半抗原与载体蛋白偶联成功。将偶联成功的三唑磷半抗原-BSA作为免疫原对小鼠进行多次免疫注射,进而获得含有三唑磷抗体的多抗血清,为三唑磷的免疫分析检测做出了理论与实际铺垫。
关键词:三唑磷;半抗原;人工抗原;抗体
目录
摘要
Abstract
1 绪论-1
1.1 农药概况-1
1.1.1 农药定义及其分类与特点-1
1.1.2 农药的使用现状-1
1.1.3 农药的危害-2
1.1.4 农药的检测方法-2
1.2 三唑磷概况-3
1.2.1 三唑磷简介-3
1.2.2 三唑磷危害-4
1.2.3 三唑磷检测-4
1.3 半抗原与载体偶联技术-5
1.3.1 载体蛋白简介-6
1.3.2 偶联方法简介-6
1.4 本论文研究的目的及意义-6
2 材料与方法-8
2.1 实验试剂与仪器-8
2.1.1 实验试剂-8
2.1.2 实验仪器-8
2.1.3 实验材料-8
2.2 实验方法-8
2.2.1 三唑磷半抗原的合成-8
2.2.2 三唑磷人工抗原的合成-9
2.2.3 紫外分光光度法判定偶联-10
2.2.4 小鼠免疫及抗体制备-11
3 结果与分析-13
3.1 三唑磷半抗原的合成-13
3.2 三唑磷人工抗原的合成-13
3.3 紫外分光光度法判定偶联-14
3.4 小鼠免疫及抗体制备-16
结论-18
致谢-19
参考文献-20