摘要:本实验以摇床培养的经亚硝酸诱变的灵芝原生质体为研究对象，采用水饱和正丁醇提取胞外三萜，甲醇提取胞内三萜，比色法测定胞内、胞外三萜产量。实验结果表明：灵芝原生质体制备条件为，采用复合酶（1%蜗牛酶+1%纤维素酶+1%溶壁酶），37℃下酶解2h。亚硝酸诱变的最佳条件是0.06mol/L，诱变1min，此时诱变第一代菌株胞内、胞外三萜产量达到了最高，分别为44.14mg/g、4.75×10-2mg/mL，比原发菌株分别提高了162.89% 70.25%。经传代后第一代、第二代和第三代胞内三萜类产量分别较原发菌株提高了162.89 %、136.75 %、110.60 %；第一代、第二代、第三代胞外三萜类产量分别较原发菌株提高了70.25%、43.01%、30.82%。
关键词 灵芝；原生质体；亚硝酸；诱变；三萜类化合物
目录
摘要
Abstract
1 绪论-1
1.1 灵芝的概况-1
1.2灵芝的化学成分-1
1.2.1三萜类化合物的结构和功能-2
1.2.2灵芝三萜类化合物的提取方法-3
1.2.3灵芝三萜类化合物的检测方法-3
1.3 诱变育种-4
1.3.1物理诱变-4
1.2.2 化学诱变-5
1.4 原生质体诱变技术-7
1.5 本论文研究的目的及意义 -7
2 材料与方法-8
2.1 实验试剂与仪器-8
2.1.1实验试剂-8
2.1.2实验仪器-8
2.2 实验方法-9
2.2.1实验材料-9
2.2.2灵芝菌种的活化与培养-9
2.2.3灵芝原生质体的制备-9
2.2.4原生质体的化学诱变与再生-10
2.2.5灵芝三萜类化合物的测定-10
2.2.6遗传性状稳定性实验-11
2.2.7酶法提取灵芝胞外三萜类化合物-11
3 结果与讨论-12
3.1 灵芝三萜类化合物标准曲线的制作-12
3.2诱变后菌落形态-12
3.3亚硝酸诱变时间和致死率-13
3.4灵芝三萜类产量的测定-14
3.4.1胞内三萜的测定-14
3.4.2胞外三萜的测定-16
3.5高产灵芝三萜类菌株遗传稳定性测定-17
3.6酶法提取灵芝三萜类化合物-18
结论-20
致谢-21
参考文献-22
