链霉菌转谷氨酰胺酶基因克隆初步分析.doc

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摘要:转谷氨酰胺酶是可以使蛋白质发生交联的一种酶,能改变蛋白质的结构,改善蛋白质的塑性、持水能力、水溶性、热稳定性等功能特性。借助微生物方法来达到转谷氨酰胺酶大规模生产的目的。所以,可应用微生物方法提取转谷氨酰胺酶,并在食品行业进行推广。本实验利用基因工程克隆技术来提高菌株表达该类酶的数量,活化并筛选链霉菌,提取链霉菌HMJ-7的基因组作为模板,利用PCR仪扩增获得转谷氨酰胺酶的基因,连接到T载体上进行测序,通过Genebank进行blast分析,确定该序列为转谷氨酰胺酶基因。

 

关键词 链霉菌HMJ-7;转谷氨酰胺酶;PCR扩增;基因克隆

 

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1转谷氨酰胺酶的概述-1

1.2转谷氨酰胺酶的催化机制-1

1.3-微生物产生的转谷氨酰胺酶简介-2

1.3.1不同来源的转谷氨酰胺酶理化性质的比较-2

1.3.2微生物转谷氨酰胺酶的优势-3

1.4转谷氨酰胺酶在食品中的应用-3

1.4.1转谷氨酰胺酶在肉制品中的应用-3

1.4.2转谷氨酰胺酶在乳制品中的应用-3

1.4.3转谷氨酰胺酶在水产品中的应用-4

1.4.4转谷氨酰胺酶在小麦粉制品中的应用-4

1.5本论文的立题背景和研究的目的意义-4

1.6本论文研究的内容-5

2 材料与方法-5

2.1 实验材料-5

2.1.1 菌株及质粒-5

2.1.1.1菌株-5

2.1.1.2 质粒-5

2.1.2培养基-6

2.1.3仪器设备-6

2.1.4实验用试剂-6

2.1.5溶液配制-7

2.2 实验方法-7

2.2.1菌株的活化-7

2.2.2发酵上清液的制备-7

2.2.3产酶菌株的筛选-8

2.2.4 链霉菌菌株基因组的提取-8

2.2.5 转谷氨酰胺酶基因的PCR克隆-9

2.2.6转谷氨酰胺酶基因与克隆载体的连接与转化-9

2.2.6.1转谷氨酰胺酶基因与克隆载体的连接-9

2.2.6.2连接产物的转化-10

3 结果与讨论-11

3.1产酶菌株的筛选-11

3.2微波法提取链霉菌菌株基因组DNA-11

3.3酶基因PCR扩增结果-12

3.4酶基因与克隆载体的连接结果-13

3.5酶基因测序及blast分析-14

结论-16

致谢-17

参考文献-18