摘要:转谷氨酰胺酶是可以使蛋白质发生交联的一种酶,能改变蛋白质的结构,改善蛋白质的塑性、持水能力、水溶性、热稳定性等功能特性。借助微生物方法来达到转谷氨酰胺酶大规模生产的目的。所以,可应用微生物方法提取转谷氨酰胺酶,并在食品行业进行推广。本实验利用基因工程克隆技术来提高菌株表达该类酶的数量,活化并筛选链霉菌,提取链霉菌HMJ-7的基因组作为模板,利用PCR仪扩增获得转谷氨酰胺酶的基因,连接到T载体上进行测序,通过Genebank进行blast分析,确定该序列为转谷氨酰胺酶基因。
关键词 链霉菌HMJ-7;转谷氨酰胺酶;PCR扩增;基因克隆
目录
摘要
Abstract
1 绪论-1
1.1转谷氨酰胺酶的概述-1
1.2转谷氨酰胺酶的催化机制-1
1.3-微生物产生的转谷氨酰胺酶简介-2
1.3.1不同来源的转谷氨酰胺酶理化性质的比较-2
1.3.2微生物转谷氨酰胺酶的优势-3
1.4转谷氨酰胺酶在食品中的应用-3
1.4.1转谷氨酰胺酶在肉制品中的应用-3
1.4.2转谷氨酰胺酶在乳制品中的应用-3
1.4.3转谷氨酰胺酶在水产品中的应用-4
1.4.4转谷氨酰胺酶在小麦粉制品中的应用-4
1.5本论文的立题背景和研究的目的意义-4
1.6本论文研究的内容-5
2 材料与方法-5
2.1 实验材料-5
2.1.1 菌株及质粒-5
2.1.1.1菌株-5
2.1.1.2 质粒-5
2.1.2培养基-6
2.1.3仪器设备-6
2.1.4实验用试剂-6
2.1.5溶液配制-7
2.2 实验方法-7
2.2.1菌株的活化-7
2.2.2发酵上清液的制备-7
2.2.3产酶菌株的筛选-8
2.2.4 链霉菌菌株基因组的提取-8
2.2.5 转谷氨酰胺酶基因的PCR克隆-9
2.2.6转谷氨酰胺酶基因与克隆载体的连接与转化-9
2.2.6.1转谷氨酰胺酶基因与克隆载体的连接-9
2.2.6.2连接产物的转化-10
3 结果与讨论-11
3.1产酶菌株的筛选-11
3.2微波法提取链霉菌菌株基因组DNA-11
3.3酶基因PCR扩增结果-12
3.4酶基因与克隆载体的连接结果-13
3.5酶基因测序及blast分析-14
结论-16
致谢-17
参考文献-18