摘要:本试验将醋醅中分离筛选得到的高产醋酸杆菌作为菌株,对乙醛脱氢酶粗酶液的pH稳定性做了一定的研究,结果表明乙醛脱氢酶在pH5.0~6.0酶稳定性较好,相对酶活保持在80%以上,其它pH下酶活较低。通过对pH稳定剂的筛选研究,发现特定浓度下的硫酸锰、氯化钙、赖氨酸对ALDH的pH稳定性具有一定的稳定作用,氯化钾、丙氨酸、甘氨酸、硫酸铵对ALDH稳定性作用明显,而Cu2+、Zn2+无稳定作用。通过正交实验,获得最优pH稳定剂组合:氯化钾2 mmol/L、甘氨酸20 mmol/L、丙氨酸15 mmol/L、硫酸铵15 mmol/L。酶液中加入组合试剂后,在不同pH下ALDH的酶活能够提高到116%~166%,在pH为6.0左右时,稳定剂的稳定性最好,能够将酶活提高166%。
关键词 醋酸杆菌;乙醛脱氢酶;pH稳定剂
目录
摘要
Abstract
1 绪论-1
1.1 食醋的概述-1
1.2 食醋发酵工艺-1
1.3 醋酸菌的概述-1
1.4 乙醛脱氢酶的简介-1
1.5乙醛脱氢酶的来源-1
1.6乙醛脱氢酶与相关疾病-2
1.6.1 ALDH与酒精中毒-2
1.6.2 ALDH与肝损伤-2
1.6.3 ALDH与心血管疾病-2
1.7 乙醛脱氢酶的发展前景-3
1.8 酶的pH稳定性-3
1.9本文研究的意义和内容-3
1.9.1 本文研究的意义-3
1.9.2 本文研究的内容-4
2 材料与方法-5
2.1试验材料-5
2.1.1菌种-5
2.1.2培养基-5
2.1.3主要仪器-5
2.1.4主要试剂-5
2.2试验方法-7
2.2.1醋酸杆菌的斜面活化与摇瓶发酵-7
2.2.2 发酵液中乙醛脱氢酶粗酶液的提取与酶活鉴定-7
2.2.3酶的pH稳定性研究-8
2.2.4不同物质对乙醛脱氢酶酶活的稳定性影响-8
3结果与分析-10
3.1 酶的pH稳定曲线-10
3.2酶的pH稳定剂筛选-10
3.2.1酶的pH稳定剂初筛-10
3.2.2酶的pH稳定剂复筛-12
3.3正交确定最佳稳定剂组合-16
3.3.1正交试验-16
3.3.2 验证试验-17
3.3.3 对比试验-17
结论-18
致谢-19
参考文献-20