摘要:实验采用酶法(酸性纤维素酶)提取银杏叶多糖。通过苯酚-硫酸法测定银杏叶多糖含量,研究加酶量、提取时间、提取温度对多糖得率的影响,同时利用Box-Behnken试
验优化提取工艺参数,用Sevag法对银杏叶粗多糖进行分离纯化,并通过薄层层析对银杏叶多糖组成分进行研究。实验结果表明:最佳提取条件为加酶量2.0%,提取时间80 min,提取温度55 ℃,此条件下多糖得率为11.05%;三个单因素对银杏叶多糖得率的影响程度为:提取时间>提取温度>加酶量;用Sevag法分离纯化粗多糖后,多糖纯度提高了48.69%;通过薄层层析确定硫酸为最佳水解酸,正丁醇:甲醇:氯仿:冰乙酸:水 = 50:18:20:6:6为最佳展层系统,银杏叶多糖组成分为葡萄糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-阿拉伯糖、L-鼠李糖。
关键词银杏叶多糖;提取;响应曲面;分离纯化;薄层层析
目录
摘要
Abstract
1 绪论-1
1.1 银杏叶概况-1
1.1.1 银杏的简介及我国的银杏叶资源-1
1.1.2 银杏叶的药用价值-1
1.2 植物多糖的研究现状-2
1.2.1 植物多糖的概念-2
1.2.2 植物多糖的分类-2
1.2.3 植物多糖的生物活性功能-2
1.2.4 植物多糖常用的提取方法-3
1.2.5 植物多糖常用的分离纯化方法-3
1.2.6 植物多糖常用的组成分分析方法-4
1.3 研究意义及内容-5
1.3.1 研究意义-5
1.3.2 研究内容-5
2 材料与方法-6
2.1 实验材料与试剂-6
2.2 实验仪器-6
2.3 实验方法-6
2.3.1 银杏叶的预处理步骤-6
2.3.2 银杏叶多糖的提取方法-6
2.3.3 测定银杏叶中多糖含量-7
2.3.4 标准曲线制作-7
2.3.5 单因素试验-8
2.3.6 响应曲面优化试验设计-8
2.3.7 银杏叶粗多糖的提取-9
2.3.8 银杏叶粗多糖的纯化-9
2.3.9 薄层层析法分析银杏叶多糖的单糖组成-10
3 结果与分析-12
3.1 单因素试验条件选择-12
3.1.1 酸性纤维素酶加酶量对银杏叶多糖得率的影响-12
3.1.2 提取时间对银杏叶多糖得率的影响-12
3.1.3 提取温度对银杏叶多糖得率的影响-13
3.2 响应曲面优化试验-14
3.2.1 优化试验-14
3.2.2 响应曲面分析及交互作用-15
3.2.3 最佳条件优化及验证结果-17
3.3 银杏叶多糖脱蛋白前后的纯度-17
3.4 银杏叶多糖组成分分析-17
3.4.1 水解酸的选择-17
3.4.2 展层系统的选择-19
3.4.3 展层系统的综合比较-21
结论-22
致谢-23
参考文献-24
附录-26