摘要：目的：考察诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度3个因素对重组大肠杆菌中NADH氧化酶表达量的影响，以得到较高产量的NADH氧化酶。方法：利用IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）诱导重组大肠杆菌中NADH氧化酶的表达，采用SDS-PAGE分析目的蛋白的表达情况，使用Ni-NTA纯化目的蛋白。结论：当诱导剂浓度为1.25 mM、诱导时间为4 h、诱导温度为15 ℃时，重组大肠杆菌中的NADH氧化酶的表达量最高，可达12.34%。
关键词：NADH氧化酶 重组大肠杆菌 IPTG 诱导表达 纯化
目录
摘要
Abstract
第一章 综述-1
1.1 NADH氧化酶的研究进展-1
1.1.1 概述-1
1.1.2 NADH氧化酶分类-1
1.1.3 NADH氧化酶作用机理-2
1.1.4 NADH氧化酶的理化性质-3
1.1.5 NADH氧化酶常见菌种-3
1.1.6 NADH氧化酶克隆表达研究背景-4
1.2 研究目的和意义-5
第二章 实验部分-6
2.1 实验仪器和材料-6
2.1.1 仪器-6
2.1.2 材料-6
2.2 实验方法-9
2.2.1 NOX基因的克隆表达-9
2.2.2诱导表达条件的优化-10
2.2.3 变性聚丙酰胺凝胶电泳-10
2.2.4 蛋白灰度测定-11
2.2.5 酶的纯化-11
2.2.6 酶活测定-12
第三章 结果与分析-13
3.1 NADH氧化酶在大肠杆菌中的重组表达-13
3.2 诱导浓度对NADH氧化酶表达量的影响-13
3.3 诱导时间对NADH氧化酶表达的影响-14
3.4 诱导温度对NADH氧化酶表达的影响-15
3.5 蛋白纯化-15
3.6 NADH标准曲线-16
3.7 酶活测定-17
结论-19
致谢-20
参考文献:-21
